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| 產(chǎn)地 | 進(jìn)口、國產(chǎn) |
| 品牌 | 帛科 |
| 貨號(hào) | BK-P64661 |
| 用途 | 公司產(chǎn)品僅用于科研 |
| 包裝規(guī)格 | 50次 |
| 純度 | % |
| CAS編號(hào) | |
| 是否進(jìn)口 | 是 |
本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格 |
貨號(hào) |
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細(xì)小病毒B19 染料法熒光定量PCR試劑盒 |
50次 |
BK-P64661 |
實(shí)驗(yàn)方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
PCR實(shí)驗(yàn)步驟：
①取凍存已裂解的細(xì)胞，室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后，15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后15到30℃孵育10分鐘后，于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí)，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其完全溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后，讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值，測(cè)定RNA溶液
濃度和純度。
使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照樣品的采集與預(yù)培養(yǎng)按照菌檢驗(yàn)要求進(jìn)行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對(duì)照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個(gè) 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照，只提供可以直接使用的 DNA 片段作為陽性對(duì)照。
2. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對(duì)照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用
6. 換槍頭，在 5 號(hào)管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對(duì)照到 5 號(hào)管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對(duì)照。放冰上待用。
7. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。放冰上待用。
CEM/C1(人急性細(xì)胞細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2鹽酸D-甘露糖，英文名或英文縮寫：D-Mannosamine HC1，級(jí)別：高，98%，規(guī)格：25毫克
HUtSMC Pellet 人平滑肌細(xì)胞團(tuán)塊 > 1 mio.cells 人表皮角質(zhì)細(xì)胞-cDNAHEK-acDNA鱗醋硼,水合 BORON PHOSPHcTq 13308-21-2
CL-0098HCT-8(人盲腸腺癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×23-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二本基溴化四氮唑噻唑藍(lán)，英文名或英文縮寫：MTT，級(jí)別：超，99%，規(guī)格：500克
RSPO1 Others Human 人 R-Spondin 1 / RSPO1 CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 二氧化鋯，英文名或英文縮寫：Zirconium dioxide，級(jí)別：5N，規(guī)格：25克
人小腦星形膠質(zhì)細(xì)胞裂解物HA-c LNeomycinSulfate
5g/25g/100g INALCO原裝
管內(nèi)皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105方(1ml)甲基索拉菲尼-d3Sorafenib-methyl-d3質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
FGF2 Others Human VEGF121 / VEGF-A 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 硫康唑Sulconazole質(zhì)量規(guī)格：美國進(jìn)口
非小細(xì)胞;NCI-H20876-羥基6-Hydroxycoumarin質(zhì)量規(guī)格：>98%(GC);進(jìn)分
CCD-1095Sk細(xì)胞，皮膚細(xì)胞 細(xì)胞,HHCC細(xì)胞 CL-0176OP9(小鼠*基質(zhì)細(xì)胞)5×106cells/瓶×2甘氨石膽酸(GLCA)Lithocholylglycine質(zhì)量規(guī)格：美國原裝進(jìn)口
敘利亞倉鼠腎細(xì)胞;BHK-21匹卡米隆Pikamilone質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
豚鼠胚胎細(xì)胞;104C1噻奈普汀鈉鹽Tianeptine salt質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
FKBP7 Others Human PPIase / FKBP7 細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) D-谷氨酰胺D-Glutamine 質(zhì)量規(guī)格：0.98
成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基 100mL扎托布洛芬Zaltoprofen質(zhì)量規(guī)格：>98%
HaCaT細(xì)胞，正常皮膚細(xì)胞 柰瑟氏菌 小鼠樹突狀細(xì)胞低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達(dá));DG6-VAP33-GFP甘膽酸鈉 ;甘氨膽酸鈉 Glycocholate Hydrate質(zhì)量規(guī)格：>98%
CCL13 Protein Human 重組 CCL13 / MCP-4 蛋白 (His 標(biāo)簽)甘露醇；D-甘露糖醇Mannitol；D-Mannitol質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
STK4 Others Human 人 STK4 / MST1 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 多球殼菌素；嗜熱菌殺酵母素（來源于無孢霉群）Myriocin from Mycelia sterilia質(zhì)量規(guī)格：≥98%,sigma分裝
猞猁皮膚成纖維樣細(xì)胞;ELS1亞精胺鹽酸鹽Spermidine tri質(zhì)量規(guī)格：≥98%
BALB/3T3細(xì)胞，BALB/C小鼠胚成纖維細(xì)胞 人*癌細(xì)胞,PC-2細(xì)胞 CM-M024小鼠成纖維細(xì)胞完全培養(yǎng)基100mL栗精胺Castanospermine質(zhì)量規(guī)格：>98%,進(jìn)分
大鼠細(xì)胞;UMR-106精胺四鹽酸鹽;鹽酸精胺Spermine tetra質(zhì)量規(guī)格：>98%,分子生物學(xué)級(jí)
CDH1 Others Human 人 Cadherin-1 / CDH1 / CD324 / E-cadherin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) D-熒光素鉀鹽，D-蟲熒光素鉀鹽D-Luciferin potassium質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR（quantitative
real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，*通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括*定量和相對(duì)定量）和定性分析。
細(xì)小病毒B19 染料法熒光定量PCR試劑盒主要服務(wù)：DNA或RNA的*定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計(jì)、RNA提取、cDNA合成、qPCR
